lucifer(luciferase荧光素酶检测)

ATP是一种含有高能磷酸键的有机化合物，是生命活动能量的直接来源。

 

ATP是一种含有高能磷酸键的有机化合物，是生命活动能量的直接来源，监测许多生物过程荧光素酶/荧光素系统是一种准确、可靠的检测少量ATP水平的方法，然而萤光素酶/萤光素系统常常因为萤光素酶易失去活性而不稳定。

BioVision解决方案如下一种高度稳定的萤光素酶：● 中国云南省特有的Diaphanes pectinealis体内的萤光素酶（rLucHS），经过遗传修饰；● 稳定性更强，在pH<8.2时，在室温下可以持续几周，在37℃持续1h以上；

● 酶活性更高，酶活可达5x10^11RLU/mg 蛋白。

超贴心组装成20-30min即可完成的试剂盒（K791-100）原理：萤光素（Luciferin）在ATP和萤光素酶存在下被氧化发光，当萤光素过量时，ATP的量与发光强度成正比室温下稳定性>10h，37℃时＞60min。

样品：组织、细胞、其他生物液体Protocol：1.   准备足够的反应混合液（1X Reaction Buffer 80 µl + Enzyme Mix 10 μl/孔）2.     样品制备在100 µl 1X Reaction Buffer中快速匀浆1 x 10^3-10^4个细胞或10 mg组织，以最大速度离心30S以清除沉淀；液体样品可以直接使用或用StayBrite™反应缓冲液稀释。

3.     标准曲线将10 µl ATP储备溶液添加到990 µl dH2O中以制成10^-4 M ATP溶液，倒入标有S1的试管中，然后再进行3-5次10倍稀释（即10 µl + 90 µl反应缓冲液以生成S2，S3，S4，其中包含10^-5 M，10^-6 M，10^-7 M ATP等）。

4.     测量96孔板中每孔先加入90 µl反应混合物，再各加10 µl标准品和样品，混合后，正确混合并用分光光度计读取发光度（L）*注意：要测量低水平的ATP，请先读取背景发光（BL），然后再读取向孔中加入90 µl反应混合液，然后添加10 µl样品或标准液。

正确混合并读取总发光度（L），从L减去BL以校正背景发光5.    计算：绘制标准曲线将样本RLU对应标准曲线，获得在样品孔中获得ATP含量（发光强度在标曲内）样品中的ATP浓度：C = Sa / Sv（pmol / µl或nmol / ml或µM）。

Sa是标准曲线中的ATP量（以pmol为单位）。Sv是添加到样品孔中的样品体积（以µl为单位）。ATP分子量：507.18 g / mol。

相关产品：货号品名7901StayBrite™ Highly Stable Luciferase萤光素酶7902D-Luciferin, Sodium Salt萤光素酶底物，易溶于水7903D-Luciferin, Potassium Salt萤光素酶底物，易溶于水，常备现货

2779D-Luciferin (Free acid) 萤光素酶底物，难溶于水K790StayBrite™ Highly Stable  Luciferase/Luciferin ReagentK801-200

Luciferase Reporter Assay KitK354ATP Colorimetric/Fluorometric Assay Kit 比色法/荧光法

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