快来看hanks液(hanks液的作用)

配液是每个新同学进入实验室后需要学会的第一件事情~~

 

版次：    2021年5月3日，第1稿【本文提要】    细胞用液体的配液前准备    细胞培养基的配液    常见其他液体的配方：D-Hanks、PBS、多聚甲醛、胰酶、含钙镁的Hanks、棕榈酸    酸缸的配制

    据我了解，一般人对做实验的认知，常停留在“烧钱”这一表面现象上因此，很多新入组的、从未做过科研的小朋友们，常常也会怀有自己课题组十分富有的错误认知事实上，极少有课题组能够做到经费自由    既然不是每一个课题组都有足够充足的经费来购买成品试剂，那么，配液就成了每个新同学进入实验室后需要学会的第一件事情了。

    本次教程将以培养基和细胞用平衡盐溶液为主要示例，概述配液的基本过程文末并将附上其他常用液体配方【细胞用液体的配液前准备】    第一天，耗时约2~3h：    我们所有给细胞使用的液体，都需要使用洁净级别最高的容器来盛放。

因此，所有的玻璃器皿，都需要经过泡酸的过程    将所用的玻璃瓶超声清洗30min（超声用水添加少量洗涤液，洗涤液不宜过多，以免超声产生大量气泡）超声清洗完成后，流动自来水洗净洗涤液继而超纯水简单涮洗一遍后，90℃烘箱烘干（约30min）。

    烘干完成后，温度较高，谨防烫伤取出玻璃瓶，室温降温待玻璃瓶降温至室温后，泡酸过夜，或泡酸8小时以上    此处强调，泡酸与捞酸过程均为危险操作，务必做好防护！    第二天，耗时约7~8h：    上午八点，选择

合适的滤器（如本课题组，为一巨大的金属滤器）、1L容量瓶、1L烧杯、400ml烧杯，超声清洗30min，流动水冲洗干净（至少10遍，彻底洗去），超纯水再冲洗    泡酸容器取出，超声上述器皿的同时，可清洗泡酸器皿。

使用流动自来水反复冲洗20遍，去除残留的酸；超纯水冲洗8遍，确保烘干后不留水垢    清洗完成后，将玻璃容器移入烘干机烘干80℃，烘干30~60min    继续完成滤器、烧杯等的清洗待超声完成后，自来水冲洗20遍，超纯水冲洗8遍。

烘干烘干后观察，各器皿锃光瓦亮，没有水垢    所有器皿烘干后，准备高压滤器跟玻璃瓶玻璃瓶瓶口拧松半圈（高压灭菌时，避免瓶内外压力差过大而发生爆裂），牛皮纸包裹瓶口所有待高压物品用包布包裹    高压锅灭菌。

通常灭菌程序为121℃，高压30min使用高压锅前务必经过培训所有的高压容器均需要谨慎对待高压灭菌锅升温至121℃后，方才开始30min的倒计时，加上高压结束后的降温降压过程，共耗时约90~120min。

高压灭菌结束后，及时取出物品并烘干检查仪器并断开电源【细胞培养基的配液】    按照前述方案准备好相应物品    以Gibco粉末培养基为例：    于1L烧杯中加入三蒸水600~800ml（不能超过800ml）。

自4℃冰箱取培养基粉末，加入烧杯，并用少量三蒸水冲洗袋内残留粉末依据袋子上说明书，加入所需NaHCO3量（或参照本课题组经验数据，DMEM加入3.7g NaHCO3、1640加入2.2g NaHCO3）。

加入双抗（使工作浓度达到100U/ml）加入转子搅拌，烧杯封上保鲜膜，继续搅拌混匀    搅拌一定时长后，将液体补至800ml，定PH至7.2~7.4（7.2为佳）；使用移液枪转移HCl & Na(OH)2调pH；定PH后，液体移至1L容量瓶定容；转子继续搅拌一定时间；

    过滤除菌【常见其他液体的配方】    1.D-Hanks：    精确称量氯化钠8.00g、氯化钾0.40g、七水合磷酸氢二钠0.09g、磷酸二氢钾0.06g、碳酸氢纳0.35g以及D葡萄糖1.00g；。

    将上述化学物置入1000mL烧杯中，先加入800mL去离子水并放置于磁力搅拌器上进行搅拌溶解；检测D-Hanks液的酸碱度，并精确调整pH值至7.2，定容至1000mL    定性滤纸过滤，并分装于储液瓶中，高温高压灭菌后，置于4℃冰箱过夜，观察确认无结晶析出后使用。

     2.PBS：    精确称量氯化钠8.00g、氯化钾0.20g、磷酸氢二钠1.44g和磷酸二氢钾0.24g；    将上述化学物置入1000mL烧杯中，先加入800mL去离子水并放置于磁力搅拌器上进行搅拌溶解；检测D-Hanks液的酸碱度，并精确调整pH值至7.2，定容至1000mL。

    定性滤纸过滤，并分装于储液瓶中，高温高压灭菌后，置于4℃冰箱过夜，观察确认无结晶析出后使用    PBS与D-Hanks的一个重要区别，即PBS不含糖    3. 3.7%多聚甲醛：    提前超声清洗小烧杯、100ml容量瓶、转子。

    精确称量3.70g多聚甲醛粉末，加入60ml PBS溶液    磁力搅拌器搅拌，期间加入氢氧化钠助溶（需要大量氢氧化钠，加入后可明显看到悬浊液变澄清）调PH至7.2~7.4常规滤纸过滤，分装，4℃保存。

    4.胰酶无菌D-Hanks溶液，至少100ml，提前4℃预冷（此处强调是D-Hanks，因为D-Hanks较PBS而言更为粘稠，配出来的胰酶效果更佳此处还要强调尽管之后还要过滤，但配液使用的液体仍然需要无菌，否则之后过滤的液体仍大概率污染，小编也不知道为什么。

）    每100ml，添加胰酶粉末0.25g，EDTA0.02g。调PH=8.0~8.1。过滤后即可使用。    5.含钙、镁的Hanks

    6.棕榈酸（10mM）的配液：    A液配制(100mM NaOH 10ml)：称取0.04gNaOH溶于10ml D-Hanks中    B液配制（100mM棕榈酸）：称取0.0256g×1.1=0.02816g棕榈酸粉末，倒入EP尖管，加入1×1.1ml A液，使用较薄的海绵飘子，80度水浴加热（约20min，视环境温度而异），直至液体澄清。

    C液配置(8%无脂肪酸BSA溶液)：称取0.4g BSA溶于D-Hanks液2.5~3ml中，配制两管，55度水浴震荡5min（可使用60度孵箱水浴，反复震荡，不用担心起过多气泡）再分别取0.5ml B液加入其中，55度水浴震荡5min（方法同前）。

    调PH：用D-Hanks溶液配置的NaOH溶液，使用PH试纸将PH调至7.2~7.4注意，记住调PH时用的NaOH液体量V，D-Hanks补足（1ml-V）此时，棕榈酸终浓度为10mM    灭菌：于超净台内过滤，分装于EP管，-20保存，避免反复冻融。

    PS：棕榈酸配液一般不用HCl调PH，且使用PH试纸调PH，因为HCl会使棕榈酸不溶，且因配液量较小，PH计电极伸不进去【酸缸的配制】    材料：重铬酸钾6 000 g、浓硫酸10000 mL、蒸馏水50 000 mL、石棉网及支架、玻璃棒、酒精灯、手套围裙白大褂。

    步骤：    (1) 将重铬酸钾放人大烧杯中，加入蒸馏水放在石棉网上加热至沸腾并搅拌，使重铬酸钾充分溶解    (2) 将重铬酸钾液倒入酸缸中，然后缓慢加入硫酸并用一长玻璃棒不断搅拌，充分混合溶解。

操作时务必注意安全，穿戴好耐酸手套和围裙，防止洗液溅到皮肤和衣物上万一不慎溅到皮肤上应立即用大量清水冲洗，及时就医结束分割线关于校稿：    小编写的文章确实缺乏校稿，还是会时不时犯一些错误，望朋友们多多包容，及时在公众号后台提醒小编修正错误，再次感谢！

    小编会继续努力，坚持把公众号做下去同时，也欢迎大家私信小编，实验交流、厨艺切磋~~利益声明：    本教程未涉及任何商业推广，所用试剂、耗材可根据各课题组需求酌情更换关于转载：    一切形式的转载，均需征得本公众号的直接同意，。

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